DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO "ABO y Rh”

PRACTICA 

DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO "ABO y Rh”

INTRODUCCIÓN

Un grupo sanguíneo es una forma de agrupar ciertas características de la sangre que dependen de los antígenos presentes en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de la sangre.             

Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en cuatro grupos en cuanto al sistema ABO: grupo A, grupo AB, grupo B y grupo O; y en dos con respecto al sistema Rh: Rh negativo o Rh positivo. Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinaciones posibles entre ambos sistemas.

Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción inmunológica que puede desembocar en muerte.

Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antígenos B en el suero de su sangre.

Las personas con sangre del tipo B tienen la combinación contraria, glóbulos rojos con antígenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antígenos A en el suero de su sangre.

Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antígenos (A o B) en la superficie de sus glóbulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos.

A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningún problema a cualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO.

Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles. El grupo O- es compatible con todos, por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universal.

Por otro lado, una persona cuyo grupo sea AB+ podrá recibir sangre de cualquier grupo, y se dice que es un receptor universal.

MATERIAL Y EQUIPO

• Tubos de ensayo de 12 x 75
• Pipetas Pasteur
• 1 gradilla
• Tubos Vacutainer con muestra sanguínea anti coagulada con EDTA
• Tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anti-coagulante
• Anti-suero Anti-A, Anti-AB, Anti-B y Anti-D *
• Eritrocitos con antígenos conocidos A1, A2, B y O
• 1 centrifuga 

*Reactivos:

Anti-suero A monoclonal Lafon

Anti-suero AB monoclonal Lafon

Anti-suero B monoclonal Lafon

Anti-suero D monoclonal NOVACLONE

TÉCNICA 

Método directo

1. Centrifugar los 3 tubos Vacutainer con muestra sanguínea anti coagulada con EDTA y el tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anti-coagulante, a una velocidad de 2500 r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.
2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya traía la muestra, y con el tipo de anti-suero: Anti-A, Anti-AB, Anti-B ó Anti-D. 
3. En cuatro tubos limpios hacer una dilución de 2-5 % de eritrocitos con agua destilada, de cada muestra. La dilución tomara un color rojo tenue, similar a la sangría.
4. Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilución de eritrocitos preparada y una gota de anti-suero, según corresponda.
5. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antígeno-anticuerpo 
6. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo.

TECNICA

Método inverso

1. Centrifugar los 3 tubos Vacutainer con muestra sanguínea anti coagulada con EDTA y el tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anti-coagulante, a una velocidad de 2500 r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado.
2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya traía la muestra, y con el tipo de eritrocitos con antígeno conocido: A1, A2, B y O.
3. Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero según corresponda y una gota de los eritrocitos con antígeno conocido.
4. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antígeno-anticuerpo 
5. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo. 

INTERPRETACIÓN 

Para el método directo la lógica fue: si en un tubo hay formación de botón (reacción antígeno-anticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antígeno que reacciona con los anticuerpos presentes en el anti-suero para ese tubo; y si no presentan aglutinación querrá decir que no corresponde el antígeno del eritrocito con el anticuerpo del anti-suero, o que el antígeno está ausente en esos eritrocitos. De ahí que pueda observarse que una muestra sanguínea muestre un solo tipo de antígenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B), ambos antígenos (AB), o ninguno de ellos (O). lo mismo sucede para el sistema Rh ; al presentarlo (Rh +) o no (Rh).

Para el método inverso el razonamiento fue: si en un tubo hay formación del botón (reacción antígeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerpos que reaccionan con los eritrocitos con antígeno conocido, los cuales sirven de reactivo para esta prueba. Por lo tanto una reacción positiva en este método definitivamente indica que el paciente no tiene eritrocitos con antígenos que reaccionarían con los anticuerpos de su plasma.

De ahí que el método se le nombre inverso.

EVIDENCIAS 

RESULTADOS

Muestra (1) : A (+)

Muestra (2): AB (+)

COMENTARIO

Esta técnica es rápida de realizar y muy sencilla, realizar grupos sanguíneos es muy fácil y practico y estos dos métodos fueron diferentes al llevarse acabo ya que fueron en tubos de ensayo y por lo general usábamos la placa. deberíamos seguir llevando acabo estas buenas técnicas  

Pero a pesar de técnicamente la tipificación de grupos sanguíneos  parece ser muy fácil, son muy frecuentes los errores. Para evitarlos es conveniente realizar la prueba en tubo, y sistemáticamente, la prueba inversa, ademas es recomendable probar la avidez de los reactivos con frecuencia. 

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 

• http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003345.htm
• http://www.buenastareas.com/materias/determinacion-del-grupo-sanguineo-directo-e-inverso/0
• http://es.scribd.com/doc/70174590/Practica-2-Gpo-Directo-e-Inverso-Bs